高特异性的PTM抗体应满足以下两个条件:
靶蛋白特异性验证:
通过基因敲低(KD)或敲除(KO)降低目标蛋白的表达水平,若抗体检测信号显著减弱或完全消失,即可确认其对目标蛋白具有高度特异性。
修饰位点特异性验证:
将修饰位点对应的氨基酸突变为不可被修饰的残基(如以丙氨酸替代),若抗体信号完全丧失,说明该抗体能特异识别该位点的翻译后修饰,验证其位点专一性。
高特异性的PTM抗体应满足以下两个条件:
靶蛋白特异性验证:
通过基因敲低(KD)或敲除(KO)降低目标蛋白的表达水平,若抗体检测信号显著减弱或完全消失,即可确认其对目标蛋白具有高度特异性。
修饰位点特异性验证:
将修饰位点对应的氨基酸突变为不可被修饰的残基(如以丙氨酸替代),若抗体信号完全丧失,说明该抗体能特异识别该位点的翻译后修饰,验证其位点专一性。